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液相色谱仪的快速发展及需要注意的事项

2022/4/1

  液相色谱仪是近年来发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定,又能用于大量的制备分离,灵活多样,其应用范围已超过其他各种分离方法,尤其在中药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长,为推动该领域的进步和发展作出了巨大贡献。
  液相色谱仪通常都被认为和大容量色谱柱和高流速有关联的。然而并不是以设备的大小和系统消耗的流动相的多少来决定制备液相色谱,而是依据分离目的来决定。分析液相的目的是给一种组份进行定量和定性。制备液相的目的是对产品的单体进行提取和纯化。与传统的纯化方法(如蒸馏、萃取)比较,制备液相是一种更有效的分离方法,因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。随着合成、植化、生化和制药等领域对高纯度组份的需求不断增加,液相色谱仪应用的领域也在迅速的扩大发展。
  液相色谱仪采用美国先进技术,提供一个快速、效率的大规模分离系统,由并联泵和具有先进电子线路、1200条/mm凹面光栅光路系统的紫外-可见检测器、全反控的工作站等组成。主要用于小型实验室,天然产物分离、蛋白质纯化与鉴定、有机合成产物分离纯化、精细化学品剖析、新药化合物筛、HPLC样品前处理。
  液相色谱仪的注意事项:
  1.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
  2.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
  3.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也要用去离子水冲洗20mL以上。
  4.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如,甲醇等),因为,纯水易长霉。
  5.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
  6.C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
  7.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗,清洗方法:
  ①以异丙醇作溶剂冲洗;
  ②放在异丙醇中间用超声波清洗;
  ③用10%稀硝酸清洗;
  8.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
  9.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
  10.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
  11.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。